产品货号:
JN3008
中文名称:
一步法RT-qPCR试剂盒(多重荧光探针)
英文名称:
BalbScript One-Step Multiplex Probe qRT-PCR Kit
产品规格:
100T|500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒是以RNA为模板的一步法多重定量检测试剂盒。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板,反转录为cDNA,使用基因特异性引物进行qPCR扩增,检测探针的荧光值进行定量。cDNA合成和qPCR反应在一个管中进行,反转录结束后可直接进行qPCR扩增而不用增加额外的步骤,有助于大量样品的处理并减少污染机会。并且可以加入多对引物,在一个管中针对多个基因进行多重扩增。本试剂盒由经过特殊工艺处理的Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs等,并结合精心优化的反应缓冲液,使反应体系中所有引物都能有效延伸,无需额外优化,能在更广泛的范围内进行准确定量。体系中添加dUTP/UDG防污染系统,可有效降解含U污染物,降低假阳性。
- 高灵敏度:检测标准品灵敏度可达10copies;
- 防污染体系:体系中添加dUTP/UDG防污染系统,可有效降解含U污染物,降低假阳性;
- 多重检测:同一反应管中可同时进行4~6个靶标的检测。
组分 | 100T | 500T |
5×Multiplex qRT-PCR buffer | 500μL | 1.25mL×2 |
Multi RT Enzyme Mix | 125μL | 625μL |
RNase-Free Water | 1mL | 1mL×5 |
ROX I | 50μL | 250μL |
ROX II | 50μL | 250μL |
保存:-20℃
- 使用时请上下颠倒轻轻混合,避免起泡,并经轻微离心后使用;
- 反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,尽量避免RNase污染;
- 为保证反应有效进行,需使用高质量的RNA模板。
- 如使用检测仪器为需要ROX校正的荧光定量仪器,请根据所使用机型对应加入相应的ROX,如果不在体系内加入校正剂,请在仪器上将荧光内参设置为“None”,再进行数据分析。
- 常用反应体系
成分 用量 5×Multiplex qRT-PCR buffer II buffer 5μL Multi RT Enzyme Mix II 1.25μL 上游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 下游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 探针(10μM) 0.5μL RNA模板 0.01~1000ng ROX(需根据机器型号选择) 0.5μL RNase -Free Water 至25μL - 推荐qPCR反应程序
1 50℃ 10min 1 95℃ 1min 40~45 95℃ 10s 60℃ 20s
附录1:根据PCR仪器选择使用ROX
- ROX I校准的Real Time PCR仪有:
ABI5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast;ABI StepOne/StepOnePlus及其他仪器。 - ROX II校准的Real Time PCR仪有:
ABI 7500/7500 Fast;ABI ViiA7;ABI Q6;ABI Quant Studio 6/7 Flex;StratageneMX4000/MX3500P/MX3000P及其他仪器。 - 不需要ROX校准的Real Time PCR仪有:
Bio-Rad CFX96/CFX 384/iCycler iQ5/iQ/My iQ5/MiniOpticon/Opticon/Opticon/Chromo4;Eppendorf MasterCyclerrealplex/realplex 2s。Cepheid SmartCycler;Illumina Eco qPCR;Roche Applied Science LightCycler 480;Thermo Scientific PikoReal Cycler;Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。
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